使用熒光分光度計(jì)掃描樣品出現(xiàn)峰值不同主要有以下幾點(diǎn)原因:
儀器穩(wěn)定性問題
光源穩(wěn)定性:熒光分光光度計(jì)的光源(如氙燈)在長(zhǎng)時(shí)間使用過程中,其光強(qiáng)可能會(huì)發(fā)生變化。如果光源的能量輸出不穩(wěn)定,會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)到的熒光強(qiáng)度發(fā)生波動(dòng)。例如,氙燈隨著使用時(shí)間的增加,其發(fā)射的光強(qiáng)可能會(huì)逐漸減弱,使得相同樣品在相同波長(zhǎng)下的熒光峰值降低。
光電倍增管穩(wěn)定性:光電倍增管是用于檢測(cè)熒光信號(hào)并將其轉(zhuǎn)換為電信號(hào)的部件。其性能也會(huì)受到環(huán)境因素(如溫度、濕度)和自身老化等因素的影響。當(dāng)光電倍增管的增益發(fā)生變化時(shí),會(huì)對(duì)檢測(cè)到的熒光信號(hào)產(chǎn)生放大或縮小的作用,從而導(dǎo)致峰值不同。例如,溫度升高可能會(huì)使光電倍增管的噪聲增加,信號(hào)檢測(cè)的準(zhǔn)確性下降,使得測(cè)量的熒光峰值出現(xiàn)偏差。
樣品自身性質(zhì)變化
光化學(xué)分解:一些熒光物質(zhì)在受到激發(fā)光照射時(shí),可能會(huì)發(fā)生光化學(xué)反應(yīng),導(dǎo)致其化學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,從而影響熒光強(qiáng)度。例如,某些含有共軛雙鍵的有機(jī)化合物在長(zhǎng)時(shí)間光照下,雙鍵可能會(huì)斷裂,使得熒光發(fā)色團(tuán)被破壞,熒光強(qiáng)度降低,峰值減小。
濃度變化:如果樣品在測(cè)量過程中有溶劑揮發(fā)等情況,會(huì)導(dǎo)致樣品濃度發(fā)生變化。熒光強(qiáng)度與樣品濃度在一定范圍內(nèi)是成正比的,當(dāng)濃度改變時(shí),熒光峰值也會(huì)相應(yīng)地改變。比如,一個(gè)含有熒光染料的水溶液在掃描過程中,由于溶劑水的揮發(fā),染料濃度升高,熒光峰值就會(huì)增大。
測(cè)量條件差異
溫度影響:溫度會(huì)對(duì)熒光物質(zhì)的熒光量子產(chǎn)率產(chǎn)生影響。一般來說,溫度升高,熒光量子產(chǎn)率可能會(huì)降低。例如,對(duì)于某些稀土配合物熒光材料,溫度每升高 10℃,熒光強(qiáng)度可能會(huì)下降 10% - 20% 左右。如果在多次測(cè)量過程中,樣品的溫度控制不好,就會(huì)導(dǎo)致熒光峰值出現(xiàn)差異。
溶液攪拌情況:如果樣品溶液沒有充分?jǐn)嚢杈鶆颍趻呙柽^程中,熒光物質(zhì)的分布可能不均勻。這樣會(huì)導(dǎo)致每次測(cè)量時(shí)檢測(cè)區(qū)域內(nèi)的熒光物質(zhì)濃度不同,從而使熒光峰值不同。例如,在測(cè)量含有沉淀的熒光樣品溶液時(shí),如果不攪拌,沉淀可能會(huì)影響局部熒光物質(zhì)的濃度,使得測(cè)量的熒光峰值不穩(wěn)定。
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